目前,DIA 技術作為蛋白質組學定量技術的主流之選,其運用獨特的 Data Independent Acquisition(數據非依賴采集)技術來采集數據。相較于傳統的數據依賴掃描模式(DDA),DIA 方法展現出卓越的特性。它擁有更出色的重復性,能確保實驗結果的穩定與可靠;具備更高的蛋白覆蓋率,如同編織了一張更為細密的網,捕捉更多蛋白質信息;還擁有令人稱贊的定量準確度。也正因如此,在諸如標志物研究、疾病精準分型以及品系比較等需要大規模樣本分析的領域中,DIA 成為了科研人員優先考量的前沿技術?。
產品定義
DIA 技術是目前主流的蛋白質組學定量技術,它采用DIA(Data Independent Acquisition,數據非依賴采集)技術進行數據采集,將整個質譜掃描質量范圍分為若干小窗口,依次對每個窗口的所有離子進行碎裂,使其能夠對掃描區間內的所有肽段離子進行高速一級 MS 掃描再進行二級 MS/MS 分析。因此,DIA 能夠對復雜樣品中幾乎所有可檢測的分子進行定量測定。 DIA 綜合了 shotgun proteomics 高通量檢測的特點與精準定量分析的優勢,是真正意義上的全掃描質譜檢測手段。
技術路線
DIA先提取樣品中總蛋白,取出一部分做蛋白濃度測定及 SDS-PAGE 檢測,另取部分進行胰蛋白酶酶解,對酶解肽段除鹽之后,對樣品進行 LC-MS/MS 鑒定。LC-MS/MS 鑒定分為兩個主要步驟,第一步采用傳統的 DDA 方法建立蛋白譜圖庫或者直接使用軟件搜庫,第二步采用 DIA 技術采集每個樣品的質譜數據,在 DDA 數據庫的基礎上進行譜圖匹配、定量信息的提取以及后續統計分析等。
技術優勢
與其它傳統定量技術相比,DIA 技術具有非常明顯的優勢。
1)與 Label-free(非標記定量)技術相比:
Label-free 技術采用的是 DDA 數據采集模式,因而其具有 DDA 固有的缺陷——低豐度蛋白鑒定重復性差,Cycle Time 變化大等;而且 Label-free 采用 MS1 質譜信息進行蛋白質定量,易受基質干擾,定量結果準確性較差。
2)與 ITRAQ/TMT 技術相比:
ITRAQ/TMT技術采用的也是 DDA 數據采集模式,同樣具有 DDA 固有的缺陷;同時 ITRAQ/TMT 技術在樣本基質復雜時,易受到其他多肽的報告離子的干擾,導致定量結果存在比值壓縮的缺點, 定量結果準確性不高。
與數據依賴掃描模式(DDA)相比,DIA方法具有更好的重復性、更高的蛋白覆蓋率和定量準確度,特別適用于大樣本的研究?。
應用領域
01
藥物研發?
DIA技術可用于藥物代謝動力學研究、藥物靶點鑒定和藥物劑量優化,提高藥物研發效率和準確性?。
02
疾病研究?
在癌癥研究中,DIA技術可揭示腫瘤細胞的變化及其對治療的響應,同時也可用于研究其他疾病的生物標志物和蛋白質相互作用網絡?。
03
生物醫學研究?
DIA技術有助于理解修飾在細胞功能和疾病發生發展中的作用機制,為生物醫學領域的發展做出貢獻?。
結果展示




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